LC液相色譜儀適用于分析高沸點不易揮發的、受熱不穩定易分解的、分子量大、極性不同的有機化合物;生物活性物質和多種天然產物;合成和天然的高分子化合物等。在自然界中,80%的有機物都可以用液相色譜系統進行分析和檢測。LC液相色譜儀系統主要應用于食品安全、藥物分析、環境保護以及衛生防疫、農業、林業、漁業、畜牧業、制造業、石油化工、質量監督、教學研究、水利系統等領域。
LC液相色譜儀系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,LC液相色譜儀被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統,下面將分別敘述其各自的組成與特點。
使用LC液相色譜儀時,液體待檢測物被注入色譜柱,通過壓力在固定相中移動,由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同,不同的物質順序離開色譜柱,通過檢測器得到不同的峰信號,zui后通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。LC液相色譜儀作為一種重要的分析方法,廣泛地應用于化學和生化分析中。液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別,它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和微粒固定相,適于分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。
LC液相色譜儀的構造
液相色譜系統主要由流動相儲液瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀組成,其整體組成類似于氣相色譜,但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。液相色譜的輸液泵要求輸液量恒定平穩,進樣系統要求進樣便利、切換嚴密。同時,由于液體流動相黏度遠遠高于氣體,為了減低柱壓,液相色譜的色譜柱一般比較粗,長度也遠小于氣相色譜柱。
液相色譜應用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個領域。
LC液相色譜儀它包括空柱和填料??罩莾缺趻伖獾牟讳P鋼管,內徑為4~5mm,長100~250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中,用柱式機械往復泵輸入新鮮脫氣的流動相。
等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液,用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)為流動相測定柱效及分離度塔板數在2~3萬/ml以上及分離度在1.5以上者,柱效好。為防止柱污染,常用1個50mm長,4~5mm內徑,裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護柱(預柱)接在主柱之前,以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經,以洗去鹽類、酸堿等雜質防止柱生銹及填料中雜質的積聚,再用甲醇流經洗滌使色譜柱獲得再生。
流動相的洗脫方式配好經脫氣的流動相放于貯液瓶中,經過有濾過頭、內徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進入色譜柱,zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法,即自洗脫開始到結束,溶劑的配比恒定。
另一類為梯度洗脫法,即使溶劑的極性強度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比,從而使同一個試樣中組分性質相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離,而整個色譜過程縮短。必須注意,梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學檢測的反相液相色譜法中。
檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收,熒光發射和電化學三種。紫外檢測器應用于對紫外光有吸收的藥物,大多數藥物分子對紫外光有吸收,故能較普遍采用,檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器,既能使流動相停流作組分的定性定量檢測,又能提高測定靈敏度,重現性較好。熒光發射檢測器對能產生熒光的藥物才能使用。
電化學檢測器是由一個碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團的各種藥物和代謝物。流出組分進入2μl的薄層電解池,在一暄電壓下電解產生電流,放大后檢測,檢測限pg級。
數據處理現代液相色譜儀帶有數據處理系統,除記錄譜外,還能自動記錄峰的保留時間,能自動積分求算峰面積,并能按照預定的程序作有關計算,報告分析結果。